无菌屏障系统中所用材料的微生物屏障特性对保障包装完整性和产品的安全十分重要。微生物屏障特性也是在所有无菌包装无菌屏障系统的特性中人们最为关注的风险。

在ISO11607-1中描述到:“最好是采用标准化的评价无菌屏障系统完好性的试验方法。但在没有适用的评价无菌屏障系统完好性试验方法时，可通过评价材料的微生物屏障特性、密封和闭合的完好性来确定系统的微生物屏障特性。”目前国际标准还没有直接评价透气式包装系统的微生物屏障特性的方法，而一般采取分别评价包装材料的微生物屏障特性、密封和闭合的完整性的方式来间接评价包装系统的微生物屏障特性。

之前小编已为大家介绍了测定微生物屏障密封性的试验方法，以及透气包装材料的微生物屏障分等试验，本文将主要介绍测定透气包装材料的微生物屏障特性的试验方法，包含湿性和干性条件下两种试验方法。本试验被设计为“合格/不合格”型试验，原则上不报告测定值精密度。

湿性条件下微生物屏障试验

方法概要

将微生物液滴加到试验样品上，液滴干燥后，进行试验以测定是否有微生物穿透到试验样品的另一面。

菌种

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus subsp.Aureus）ATCC 6538

试剂

胰酪大豆胨液体培养基（TSB）、营养琼脂（NA）、无菌脱纤维羊血

仪器

生物安全柜、超净工作台、生化培养箱

菌液制备

• 取金黄色葡萄球菌传代培养，于37℃培养24 h备用，制成约1×107 cfu/ml菌液。
• 用于试验的微生物悬液中的微生物数量应为107—108 个/ml。

试验施行

• 取5份待测样品包装材料均裁成边长约50 mm的正方形，灭菌备用。
• 将样品在实际使用中可能受细菌污染的一面朝上，放置在无菌平皿中。取配制的金黄色葡萄球菌菌悬液，1：100稀释，5滴，每滴约0.1 ml，均匀地滴在样品上，互不触碰，在19-25℃下干燥6-16 h。
• 将染菌样片的内表面完全平铺于血琼脂平板表面接触5-6 s后移去。然后将血琼脂平板放于37℃培养16-24 h，观察细菌生长情况。

阳性对照：参照以上方法取样并接种干燥，将其接种面与血琼脂平板接触。然后培养观察应有明显菌落生长。

阴性对照：将未接种的样片与血琼脂平板接触。然后培养观察应无菌落生长。

试验评价

零生长：若所有的5个血琼脂平板均未出现生长迹象，则表明样品包装阻菌性能良好。

有生长：若在5个血琼脂平板上生长的菌落不超过5个，则再取20份样品重复测试。若20个血琼脂平板上，生长的菌落仍不超过5个，则此包装材料合格。

试验报告

试验报告应包括：

试验样品类型；

取样地点和日期；

菌落数（单个平板菌落数和所有平板总菌落数）；

肉汤中微生物数量；

阴性和阳性检查结果。

干性条件微生物屏障试验

方法概要

通过对待测包装材料密封的微生物屏障装置中的空气进行冷却，空气流（受到抽吸）将进入试验瓶中。如果冷却前包装材料上有微生物培养物覆盖，空气流可能会使携带微生物的颗粒穿过包装材料。用微生物学技术记录通过包装材料的任何微生物并进行评价。

菌种

萎缩芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus）ATCC 9372

试剂

营养琼脂（NA）、染菌石英粉（每瓶含0.25g的106CFU/ml的萎缩芽孢杆菌）仪器

生物安全柜、超净工作台、生化培养箱、高低温交变湿热试验箱

仪器

生物安全柜、超净工作台、生化培养箱、高低温交变湿热试验箱

试验施行

• 取待测样品10份，将外包装材料裁成直径为38至42 mm的圆形样品。
• Ø 在洗净的玻璃瓶中倒入约20 ml培养液，待其冷却凝固。
• Ø 将圆形样品放在两个密封圈之间，置于实验室用玻璃瓶的边缘，并用螺旋阀帽将其固定，这样样品与密封圈就能够紧紧地贴在玻璃瓶的边缘。
• Ø 使检测用具在121℃下经过20 min蒸汽灭菌器的灭菌。
• Ø 检测用具经过消毒并且降到室温后，在每个样品表面上均匀撒上约0.25 g的染菌石英粉。
• Ø 把检测用具放入培养箱并且加热到（50±3）℃，然后再放入（10±3）℃的冰箱中。重复5次。
• Ø 将微生物屏障试验组件在37℃下培养24 h。

阴性对照：参照上述方法取样试验，样品表面不添加染菌石英粉作为阴性对照。

阳性对照：用直径为0.7 mm的细针在样品表面刺孔（大约10个小孔）并添加染菌石英粉作为阳性对照，然后培养观察。

试验评价

当10个样品中的菌落总数没有超过15个，并且每个样品中的菌落数没有超过5个，则认为包装材料足以作为无菌屏障。

试验报告

试验报告宜包括：

试验样品类型；

取样地点和日期；

菌落数（单个试样菌落数和所有试样总菌落数）。

注意事项

• 本方法与《消毒技术规范》（2002年版）对于带有灭菌标识的灭菌物品包装物需要进行的微生物屏障试验方法给出的原理一致，但是菌液浓度不一致。
• 在湿性条件下，为使整个试验表面都与琼脂接触，抹平操作时需注意尽量使试样受力均匀，避免弄破血琼脂平板；注意观察菌悬液滴加点的位置，使其充分接触血琼脂平板表面；镊子不能接触血琼脂平板表面，易出现假阳性。

在干性条件下，产生气流这一操作时，考虑不同实验室的加热和冷却设备的功率、体积等的不同，建议不同的实验室根据自己的设备情况，在试验开始前预先测定加热时间和冷却时间。在验证充分的基础上，可以不必每次试验都预先对加热时间和冷却时间进行测定。

【参考资料】DIN 58953-6:2016; 消毒技术规范（2002年版）; YY/T 0681.14-2018

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